Экстракция смесью фенол-хлороформ

Экстракцию смесью фенол–хлороформ используют в молекулярной биологии для выделения нуклеиновых кислот и удаления белков и липидов.^[1]

К водным образцам, лизатам клеток, гомогенатам тканей, добавляют равный объем смеси фенол:хлороформ. Смесь фенола и хлороформа не смешивается с водой, образец центрифугируют для лучшего разделения двух фаз. В результате менее плотная водная фаза находится сверху от органической (фенол:хлороформ). Белки и гидрофобные липиды остаются в нижней органической фазе, а нуклеиновые кислоты (а также соли, сахара и т. д.) в верхней водной фазе. Верхнюю водную фазу отбирают пипеткой, стараясь не внести органическую фазу или интерфазу. Эту процедуру часто выполняют несколько раз, чтобы увеличить чистоту ДНК.^[2]

Если смесь имеет кислую среду, ДНК будет попадать в органическую фазу, а РНК оставаться в водной фазе.

• Экстракция гуанидин тиоцианатом - фенол - хлороформом
• Спиртовое осаждение
• Очистка нуклеиновых кислот спин-колонками